Pour savoir si un patient est atteint d’une infection urinaire, nous avons besoin d’un échantillon de son urine, sur lequel nous allons faire :

– Un isolement des bactéries sur gélose,

– Puis une coloration de Gram à partir d’un frottis bactérien.

– Enfin, une observation du frottis colorés au microscope optique.

Grâce à cela, nous allons déterminer l’origine de l’infection, à l’aide d’un tableau d’orientation de différentes bactéries.

 

Mais qu’est-ce que cela signifie ?

            Tout d’abord, un isolement sur gélose est une technique qui consiste à disposer des micro-organismes à la surface d’une gélose afin d’obtenir des colonies isolées, c’est-à-dire, des colonies éloignées les unes des autres pour pouvoir les observer et les étudier facilement.

Pour le réaliser, il faut tout d’abord couler la gélose en surfusion dans une boîte de Petri.

Lorsque la gélose est solidifiée, il faut séparer la boite en trois parties (ou trois cadrans). Ensuite, il faut faire des stries très serrées sur le premier cadran, sans creuser la gélose, à l’aide d’une pipette Pasteur boutonnée stérile. Puis il faut tourner la boite d’un quart de tour vers la gauche, et il faut recommencer le dépôt des bactéries sur les deux derniers cadrans.

Après 24h d’incubation à 37 °C, on doit observer de nombreuses colonies dans le premier cadran. Puis au fur et à mesure qu’on a déposé des micro-organismes,on doit observer de moins en moins de colonies, jusqu’à les voir séparément dans le troisième cadran.

Ensuite, la coloration de Gram permet de différencier deux grandes catégories de bactéries : les bactéries à Gram positif et les bactéries à Gram négatif. Les bactéries à Gram positif ont une paroi épaisse et pauvre en lipides, tandis que les bactéries à Gram négatif ont une paroi fine et riche en lipides.

La coloration s’applique sur un frottis bactérien. Pour le réaliser, il faut mettre une goutte d’eau physiologique sur une lame, prélever un petit fragment de colonie isolée, puis la déposer sur la lame en réalisant un cercle de plus en plus élargi. Ensuite, il faut le fixer en le recouvrant d’alcool, pendant trois minutes ; cette étape permet de tuer les bactéries déposées sur la lame.

Pour colorer le frottis, il faut le recouvrir de :

– Violet de gentiane pendant une minute (colorant violet qui pénètre dans les bactéries et colore le cytoplasme en violet)

– Lugol pendant une minute (il fixe le violet dans le cytoplasme)

– Puis, il faut ensuite faire couler de l’éthanol pendant dix secondes (il dissout les lipides et décolore donc les bactéries)

– Enfin, il faut recouvrir le frottis de fuchsine (il colore en rose les bactéries décolorées précédemment) pendant une minute.

Les bactéries à Gram positif sont alors colorées en violet et les bactéries à Gram négatif en rose.

Après, pour l’observation au microscope, il faut observer au grossissement x100, avec de l’huile à immersion.

L’observation microscopique nous montre :

– Des bactéries roses : donc à Gram négatif ;

– De forme allongée : ce sont donc des bacilles ;

– Isolées.

D’après le tableau d’orientation bactérienne fourni, nous en déduisons que la bactérie à l’origine de l’infection urinaire est : Escherichia coli.

 

Article rédigé par Clara, Sarah et Norah – Seconde 1