Ressentez-vous des douleurs horribles lorsque vous urinez ?! Si c’est le cas, vous avez probablement une infection urinaire !!

Alors, suivez ce tutoriel pour pouvoir vous auto-diagnostiquer !

 

Pour réaliser cette expérience, vous aurez besoin de :

• Un tube à essai contenant de l’urine
• Une gélose nutritive ordinaire stérile
• Une boîte de Pétri
• Une oëse
• Un flacon d’eau physiologique
• Une lame pour microscope
• Du violet de gentiane (colorant)
• DU lugol
• De l’éthanol
• De la fuchsine
• Un microscope (ou une très bonne vue !)
• Un bec électrique
• Un marqueur

 

Pour commencer l’expérience, il faut préparer la boîte de Petri contenant la gélose, avec le dépôt bactérien. Ensuite, il faut préparer la lame et la coloration pour finir par l’observation au microscope optique.

 

Isolement sur gélose : 

Pour réaliser cette culture de bactéries, il faut prendre une boîte de Petri et la remplir à moitié de gélose chaude à 55°C (= gélose en surfusion).

Une fois la gélose refroidie et solidifiée, il faut faire des marquages sur le fond de la boîte : pour cela, il faut tracer un diamètre, puis un rayon perpendiculaire au diamètre tracé.

C’est presque fini ! Il faut encore déposer les bactéries. Pour cela, il faut d’abord stériliser l’oëse dans le bac électrique, et prélever avec de l’urine. Puis, il fait déposer les bactéries en réalisant des stries serrées sur la moitié, puis tourner la boîte de 90° et réaliser des stries serrées sur ¼, et enfin, tourner la boîte à nouveau de 90° et faire des stries serrées sur le dernier ¼.

Pour terminer, il faut incuber la gélose 24h à 37°C pour permettre aux bactéries de se développer.

 

Préparation de la lame :

Après 24h, la gélose utilisée, BCP (Pourpre de BromoCrésol), est restée violette ou devenue jaune, en fonction du type de bactéries déposées à la surface.

Maintenant, il est temps de préparer la lame pour observer les bactéries !

Pour commencer, il faut placer une goutte d’eau physiologique sur une lame propre et sèche, puis, prélever un fragment de colonie avec une oëse stérilisée, et l’étaler sur la lame en faisant des cercles concentriques. Il faut ensuite faire sécher la lame, à proximité du bec électrique, puis fixer les bactéries en disposant de l’éthanol sur la lame pendant 3 minutes. Le manipulateur doit ensuite rincer abondamment à l’eau, mais doucement (pour éviter de décoller les bactéries déposées sur la lame), puis sécher la lame avec du papier filtre.

Désormais, les bactéries sont fixées sur la lame, et la coloration de Gram peut commencer. Pour cela, il faut plonger le frottis (= la lame avec les bactéries dans le violet de gentiane, pendant 1 minute, puis rincer à l’eau et égoutter. Pour la seconde coloration, il faut recouvrir le frottis de lugol pendant une minute, et rincer à l’eau, puis égoutter. Encore une fois, il faut utiliser de l’éthanol, mais, cette fois-ci, en la faisant couler sur la lame pendant 10 secondes. Après avoir rincé, la dernière étape consiste à immerger le frottis pendant une minute dans la fuchsine, puis à la sécher entre deux morceaux de papier filtre.

Bien joué ! Le plus dur est terminé !

 

L’observation :

Pour cette observation, il faut utiliser un microscope optique, avec un objectif x100 à immersion (ne pas oublier l’huile !!). Il faut obligatoirement ouvrir le diaphragme, rapprocher le condenseur et augmenter la puissance de la lumière pour pouvoir observer convenablement les bactéries colorées.

Pour une meilleure observation, il faut chercher une zone où la densité des bactéries est correcte ; elles ne doivent pas être trop éloignées, ni trop regroupées ! Maintenant que l’observation est possible, il ne reste plus qu’à faire l’observation et comparer ce qu’on voit aux éléments du tableau.

Pour aider :

Violer => Gram +

Rose => Gram –

Bactérie ronde => coque

Bactéries allongée => bacille

	Classification	Morphologie	Mode de groupement
Salmonella	Gram –	Bacille	Bactéries isolées
Enterococcus faecalis	Gram +	Coque	Courtes chaînettes
Escherichia coli	Gram –	Bacille	Bactéries isolées
Lactobacillus acidophilus	Gram +	Bacille	Chaînettes
Staphylococcus aureus	Gram +	Coque	Grappes

 

Article rédigé par Louis, Sacha et Tidiane  – Seconde 10 – 16 décembre 2021